የቫይረስ ኒውክሊክ አሲድ መለየት

የአብዛኞቹ ቫይረሶች የጂኖሚክ ቅደም ተከተል ታውቋል.ከተጨማሪ የቫይረስ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ክፍሎች ጋር ለመደባለቅ የተነደፉ አጫጭር የዲ ኤን ኤ ክፍሎች የሆኑ ኑክሊክ አሲድ መመርመሪያዎች።የ polymerase chain reaction (PCR) ቫይረስን ለመለየት የበለጠ ቀልጣፋ ዘዴ ነው።ከፍተኛ የመመርመሪያ ዘዴዎች በቅርብ ጊዜ ተዘጋጅተዋል.

ሀ. ኑክሊክ አሲድ የማዳቀል ዘዴ

ኑክሊክ አሲድ ማዳቀል፣በዋነኛነት ደቡባዊ ብሎቲንግ(ደቡብ) እና ሰሜናዊ ብሎቲንግ(ሰሜን)ን ጨምሮ፣ በቫይረሱ ​​መመርመሪያ መስክ ውስጥ ፈጣን የሆነ አዲስ ቴክኒክ ነው።የማዳቀል ሙከራው ምክንያት ከተሟሉ የቫይረስ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ክፍሎች ጋር ለመደባለቅ የተነደፉትን አጫጭር የዲኤንኤ ክፍሎችን መጠቀም ነው።በማሞቂያ ወይም በአልካላይን ህክምና፣ ባለ ሁለት ገመድ ኢላማ ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ወደ ነጠላ ክሮች ተለያይተው በጠንካራ ድጋፍ ላይ የማይንቀሳቀሱ ናቸው።ከዚያ በኋላ መመርመሪያው ታክሏል እና ከተፈለገው ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ ጋር ይደባለቃል።ምርመራው በኢሶቶፕ ወይም ራዲዮአክቲቭ ባልሆነ ኑክሊድ እንደተሰየመ፣ ኢላማውን ዲ ኤን ኤ ወይም አር ኤን ኤ በአውቶራዲዮግራፊ ወይም በባዮቲን-አቪዲን ሲስተም ሊታወቅ ይችላል።አብዛኛዎቹ የቫይራል ጂኖምዎች ክሎኒንግ እና ቅደም ተከተላቸው ስለሆኑ በናሙናው ውስጥ እንደ መመርመሪያዎች ቫይረስ-ተኮር ቅደም ተከተሎችን በመጠቀም ሊገኙ ይችላሉ.በአሁኑ ጊዜ የማዳቀል ዘዴዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ: ነጥብ ነጠብጣብ , በሴሎች ውስጥ በቦታው ላይ ማዳቀል , የዲ ኤን ኤ መጨፍጨፍ (ዲ ኤን ኤ) (ደቡብ ነጠብጣብ) እና አር ኤን ኤ ብሎቲንግ (አር ኤን ኤ) (ሰሜን ነጠብጣብ).

B.PCR ቴክኖሎጂ

በቅርብ ዓመታት ውስጥ, በ PCR ላይ ተመስርተው ተከታታይ የ in vitro ኑክሊክ አሲድ ማጉላት ቴክኒኮች ተዘጋጅተዋል, የማይታወቁ ወይም የማይበቅሉ ቫይረሶችን ለመሞከር.PCR የተወሰኑ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን በብልቃጥ ፖሊሜሬሴሽን ምላሽ ሊፈጥር የሚችል ዘዴ ነው።የ PCR ሂደት ሶስት እርከኖች ያሉት የሙቀት ዑደት ያካትታል- denaturation , annealing , እና ማራዘሚያ በከፍተኛ ሙቀት (93 ℃ ~ 95 ℃) ላይ, ባለ ሁለት ገመድ ዲ ኤን ኤ ወደ ሁለት ነጠላ የዲ ኤን ኤ ክሮች ተከፍሏል;ከዚያም በዝቅተኛ የሙቀት መጠን (37 ℃ ~ 60 ℃) ፣ ሁለት የተዋሃዱ ኑክሊዮታይድ ፕሪመርሮች ወደ ተጨማሪው የዲ ኤን ኤ ክፍልፋዮች ይጎርፋሉ።ለTaq ኢንዛይም (72 ℃) በተገቢው የሙቀት መጠን የአዳዲስ ዲኤንኤ ሰንሰለቶች ውህደት ከፕሪመር 3'ጫፍ ጀምሮ ተጨማሪ ዲኤንኤን እንደ አብነት እና ነጠላ ኑክሊዮታይድ እንደ ቁሳቁስ በመጠቀም ይጀምራል።ስለዚህ ከእያንዳንዱ ዑደት በኋላ አንድ የዲኤንኤ ሰንሰለት ወደ ሁለት ሰንሰለቶች መጨመር ይቻላል.ይህንን ሂደት በመድገም እያንዳንዱ የዲኤንኤ ሰንሰለት በአንድ ዑደት ውስጥ የተዋሃደ በሚቀጥለው ዑደት ውስጥ እንደ አብነት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል, እና በእያንዳንዱ ዑደት ውስጥ የዲኤንኤ ሰንሰለቶች ቁጥር በእጥፍ ይጨምራል, ይህ ማለት የ PCR ምርት በ 2n ሎግ ፍጥነት ይጨምራል.ከ 25 እስከ 30 ዑደቶች በኋላ የ PCR ምርት በኤሌክትሮፊዮሬሲስ ተለይቶ ይታወቃል, እና ልዩ የዲ ኤን ኤ ምርቶች በ UV መብራት (254nm) ውስጥ ሊታዩ ይችላሉ.ለልዩነት፣ ለስሜታዊነት እና ለአመቺነት፣ PCR እንደ HCV፣ HIV፣ CMV እና HPV ባሉ ብዙ የቫይረስ ኢንፌክሽኖች ክሊኒካዊ ምርመራ ውስጥ ተቀባይነት አግኝቷል።PCR በጣም ስሜታዊ ስለሆነ በfg ደረጃ የቫይረስ ዲ ኤን ኤ ፈልጎ ማግኘት ይችላል፣የሐሰት አወንታን ለማስወገድ ክዋኔው በጥንቃቄ መደረግ አለበት።በተጨማሪም የኒውክሊክ አሲድ ምርመራ አወንታዊ ውጤት በናሙናው ውስጥ የቀጥታ ተላላፊ ቫይረስ አለ ማለት አይደለም።

የ PCR ቴክኒክን በስፋት በመተግበር፣ ለተለያዩ የፈተና ዓላማዎች በ PCR ቴክኒክ ላይ በመመስረት አዳዲስ ቴክኒኮች እና ዘዴዎች ተዘጋጅተዋል።ለምሳሌ፣ የእውነተኛ ጊዜ መጠን PCR የቫይረስ ጭነትን መለየት ይችላል።በቦታው PCR በቲሹ ወይም በሴሎች ውስጥ የቫይረስ ኢንፌክሽንን ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል;የጎጆው PCR የ PCR ልዩነት ሊጨምር ይችላል።ከነሱ መካከል የእውነተኛ ጊዜ አሃዛዊ PCR በበለጠ ፍጥነት ተዘጋጅቷል.ብዙ አዳዲስ ቴክኒኮች፣ እንደ TaqMan hydrolysis probe፣ hybridization probe እና ሞለኪውላር ቢከን መፈተሻ፣ በክሊኒካዊ ምርምር ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ የዋለው በእውነተኛ ጊዜ PCR ቴክኒክ ውስጥ ተቀላቅለዋል።በታካሚዎች የሰውነት ፈሳሽ ውስጥ ያለውን የቫይረስ ጭነት በትክክል ከመለየት በተጨማሪ ይህ ዘዴ መድኃኒቱን የመቋቋም ችሎታ ያለው ሚውታንትን ለመለየት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል።ስለዚህ፣ የእውነተኛ ጊዜ አሃዛዊ PCR በዋነኝነት የሚተገበረው በፈውስ ውጤት ግምገማ እና በመድኃኒት መቻቻል ክትትል ነው።

ሐ. የቫይራል ኑክሊክ አሲዶችን በከፍተኛ ደረጃ መለየት

አዳዲስ ድንገተኛ ተላላፊ በሽታዎችን በፍጥነት ለመመርመር የሚያስፈልጉትን ፍላጎቶች ለማሟላት፣ እንደ ዲ ኤን ኤ ቺፕስ (ዲ ኤን ኤ) ያሉ የተለያዩ ከፍተኛ የፍተሻ ዘዴዎች ተመስርተዋል።ለዲኤንኤ ቺፖችስ የተወሰኑ መመርመሪያዎች ተቀናጅተው ከትናንሽ የሲሊኮን ቺፖች ጋር በጣም ከፍተኛ ጥግግት ውስጥ ተያይዘው የዲኤንኤ መመርመሪያ ማይክሮአረይ (ዲ ኤን ኤ) ይመሰርታሉ ይህም ከናሙና ጋር ሊዋሃድ ይችላል።የማዳቀል ምልክቱ በኮንፎካል ማይክሮስኮፕ ወይም በሌዘር ስካነር ሊቀረጽ እና በኮምፒዩተር ተጨማሪ ሊሰራ እና የተለያዩ ጂኖችን የሚመለከት ግዙፍ የመረጃ ስብስብ ማግኘት ይቻላል።ሁለት ዓይነት የዲ ኤን ኤ ቺፕ አለ.የ "ሲንተሲስ ቺፕ" እንደሚከተለው ነው-የተወሰኑ ኦሊጎኑክሊዮታይዶች በቀጥታ በቺፕስ ላይ ይዋሃዳሉ.ሌላው የዲኤንኤ ገንዳ ቺፕ ነው.የክሎድ ጂኖች ወይም PCR ምርቶች በስላይድ ላይ በቅደም ተከተል ታትመዋል።የዲኤንኤ ቺፕ ቴክኖሎጂ ጥቅም እጅግ በጣም ብዙ የሆኑ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን በአንድ ጊዜ ማግኘት ነው።የቅርብ ጊዜ ስሪት በሽታ አምጪ ማወቂያ ቺፕ በአንድ ጊዜ ከ1700 በላይ የሰው ቫይረሶችን መለየት ይችላል።የዲ ኤን ኤ ቺፕ ቴክኖሎጂ የባህላዊ ኑክሊክ አሲድ የማዳቀል ዘዴዎችን ችግሮች የፈታ ሲሆን በቫይረስ ምርመራ እና ኤፒዲሚዮሎጂ ጥናት ውስጥ በጣም ሰፊ አፕሊኬሽኖች አሉት።